荧光试验结果观察

荧光试验结果观察

       日常试验中，经常会遇到大肠杆菌需要观察荧光是情况。国标4789.38-2012大肠埃希氏菌计数中第二法（VRBA-MUG计数)，GB/T 5750.12-2006 水及水源水中的大肠埃希氏检验，《包装饮用水》 GB19298-2014中铜绿假单胞菌检验(按照GB/T 8538-2008)都需要观察荧光，可见荧光结果观察的重要性。
       MUG，是4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷的缩写，该物质为β-半乳糖苷酶作用的底物，β-半乳糖苷酶与MUG结合并剪切β-半乳糖苷键，释放荧光显色基团4-甲基伞形酮，在紫外光（λ=366nm）下观察，培养物发出蓝色荧光。
     观察荧光的条件：
1）紫外光为366nm波长；
2）在黑暗的环境下观察，有助于更好的观察荧光；
3）紫外灯灯管最好直接照射在待测平板或试管上，无玻璃等物品吸收紫外光。
4）使用空白管、阳性菌、阴性菌做对照。
    推荐使用“简易便携式荧光检测灯”，不但具备以上三个要求，而且避免了紫外灯直接照射人的情况，对实验人员有所保护。
    如使用台式紫外灯，建议使用紫外线防护眼镜。
空白产荧光原因分析：
1）试管或平皿洗涮不干净所致。试管或平皿中残留4-甲基伞形酮，会导致空白有荧光。
2）观察荧光的紫外灯不合适。紫外灯波长虽为366nm，但外侧有玻璃灯罩、或者功率太大（瓦数太高、灯过亮）均会影响荧光效果。
3）试管或平皿本身原因。有些试管或平皿，本身由于质量原因，在紫外灯下自身就带有光亮。使用前，可以先拿几种试管或平皿装入蒸馏水，先在紫外灯下观察一下，然后挑取亮度比较暗的容器使用。
建议：
建议做荧光试验时，采用阳性对照菌同时观察，可更简单明了。