海洋水质监测海水检测培养基

海洋水质监测海水检测培养基

海洋水质监测微生物指标包括：弧菌、异养细菌总数、粪大肠杆菌
       弧菌是海洋中常见菌，近期广西村民哄抢榴莲食物中毒事件中的罪魁祸首即是弧菌中的一种--副溶血性弧菌。副溶血性弧菌是一种海洋细菌，主要来源于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产品。此菌对酸敏感，在普通食醋中5分钟即可杀死；对热的抵抗力较弱，56℃加热5~10min或90℃加热1min即可将其灭活。海水中常见的致病弧菌还有创伤弧菌，霍乱弧菌等。为避免弧菌引起的食物中毒，日常海鲜需要煮熟食用，蘸醋有助于杀死弧菌。副溶血性弧菌也是养殖业中常见的致病菌，检测弧菌的TCBS培养基加热煮沸即可使用，养殖户的简易实验室也可以检测弧菌。
       海洋水质监测海水检测培养基包括检测弧菌的BTB培养基、TCBS培养基、PCA培养基（含氯化钠）；检测异养细菌的2216E琼脂培养基；检测粪大肠杆菌的乳糖蛋白胨培养液，EC肉汤、M-TEC培养基等。
 
海水增养殖区监测技术规程
.4监测项目
4.4.1水质监测
—— 必测项目：水温、透明度、化学需氧量（COD）、pH、溶解氧（DO）、盐度、无机氮（氨盐、硝酸盐、亚硝酸盐）、活性磷酸盐、油类、叶绿素-a；
—— 选测项目：总氮、总磷、汞、镉、铅、铜、砷、硅酸盐、数量、异养细菌总数、浮游植物、挥发酚。
4.4.2沉积物监测
—— 必测项目：总汞、镉、铅、铜、砷、油类、DDT、多氯联苯、硫化物、有机质、粪大肠杆菌；
—— 选测项目：异养细菌总数、总磷、总氮、底栖生物。
附录F （规范性附录） 沉积物粪大肠杆菌—发酵法
F.1 样品预处理
F.2 分离方法
附录G （规范性附录） 沉积物异养细菌总数—平板计数法
G.1 样品预处理
G.2 分离方法
粪大肠杆菌/发酵法--GB17387.7
弧菌数量/平板计数法/参见附录A
异养细菌总数/平板计数法/GB17387.7
附录A（规范性附录）
弧菌数量—平板计数法
A.1培养基
—— 计数培养基BTB：牛肉膏3.0g， 蛋白胨10.0g，蔗糖15.0g，氯化钠20.0g，Teepol 1.0g，
溴麝香草酚蓝0.06mg，蒸馏水1000mL。配制方法：将上述数量的牛肉膏、蛋白胨、蔗糖、氯化钠和Teepol加热溶解于1000mL蒸馏水中，
用16%的氢氧化钠调整pH为7.8，再将溴麝香草酚蓝按上述量溶解其中。分装于试管（每管5mL）中，塞棉塞，包装后于115℃高压蒸气灭菌20min，
然后于冰箱中冷藏备用。
—— 平板分离培养基TCBS：蛋白胨10.0g， 酵母膏5.0g，柠檬酸钠10.0g，硫代硫酸钠10.0g， 蔗糖20.0g，胆盐8.0g，
氯化钠10.0g，柠檬酸铁1.0g，
溴麝香草酚蓝0.04g，麝香草酚蓝0.04g，琼脂15g，蒸馏水1000mL。配制方法：将上述数量的蛋白胨、酵母膏、柠檬酸钠、硫代硫酸钠、蔗糖、胆盐、氯化钠、柠檬酸铁、溴麝香草酚蓝和麝香草酚蓝加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为8.6，在加热至沸腾。然后冷却至55℃，
倾注无菌培养皿即可。该培养基不需要高压灭菌。
—— PAC斜面培养基（比食品微生物PCA多氯化钠成分）：蛋白栋5.0g，酵母膏2.5g， 葡萄糖1.0g，氯化钠10.0g，
琼脂15.0g，蒸馏水1000mL。配制方法：将上述量蛋白栋、酵母膏、葡萄糖、氯化钠和琼脂加热溶解于1000mL蒸馏水中，
调节pH为7.0，分装于试管（每管5mL）中，
塞棉塞，包装后于高压蒸汽灭菌锅中115℃灭菌20min。灭菌后立即取出装有上述培养基的试管，倾斜放置于实验台面上，使其冷却后培养基在试管内形成斜面。放置冰箱中冷藏备用。
A.2检测步骤
—— 弧菌的分离和计数：采用9管“MPN”法以3个不同稀释度（原水样、10-1和10-2）的水样接种于BTB培养液的试管中， 37℃培养18h，
把阳性管中的菌液于TCBS平板上划线分离， 平板放进培养箱里，
于37℃培养18h，将出现的绿色、蓝绿色和黄色菌种接种于PCA斜面上保存。分离菌株首先经革兰氏染色、氧化酶、运动性和0/129弧菌素敏感实验等，符合弧菌特征的菌株，视其来源的“MPN”管数，
查“MPN”表进行计数。
—— 弧菌种的鉴定：从TCBS平板上分离的菌株经上述4个弧菌属基本特征鉴别后，采用API20E系统进行生理生化特征鉴定，
并做耐盐性试验（盐度为0、3%、6%、8%和10%）， 根据API20E反应结果， 查API20E检索表， 即可得到种名 。
注： 除有特殊需要外，注： 可不注： 做第二步。
 
海洋生态环境监测技术规程
附录B （规范性附录） 生物体内细菌学指标检测技术
（规范性附录）
生物体内细菌学指标检测技术
B.1仪器设备
—— 恒温培养箱：25℃-44℃；
——干热灭菌箱；
—— 高压蒸气灭菌器；
—— 接种环；
—— 培养皿：直径9cm；
—— 试管：12x150mm；
—— 吸量管：1，10ml；
—— 发酵管：5x30mm；
—— 玻璃刮棒：接种用；
—— 纱布和棉花：塞试管用；
—— 锥形烧瓶；
—— 牛皮纸；
—— 电炉：2000W；
—— 超净工作台；
—— 一般实验常用仪器设备；
—— 无菌研钵
B.2采样方法
进行细菌学指标检测分析的样品需要无菌采集，并且需要尽快进行实验室检测分析，不可长时间保藏。现场采集的生物样品须在冷藏条件下于6小时内送回实验室进行分析。
现场生物样品采集系用一次性消毒手套采取活生物于无菌朔料袋中，做好标记、及时装入便携式冷藏箱中。
B.3测试分析方法
B.3.1测试分析方法-发酵法
B.3.1.1方法原理
大肠菌群系一群在37℃或44℃生长时能使乳糖发酵、在24h内产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。大肠菌群数系指单位生物样中所含有的“大肠菌群”的数目。一般在37℃培养生长的称为“总大肠菌群”，在44℃培养生长的称为“粪大肠菌群”。海洋生物检验采用44℃培养法，以检出粪大肠菌群。
发酵法系通过初发酵及复发酵二个步骤，以证实生物体中是否存在粪大肠菌群并测定其数目。
B.3.1.2试剂及培养基配制
a） 试剂配制
1） 溴甲酚紫乙醇溶液
称取1.6g的溴甲酚紫[C6H4SO2OC（C6H2CH3OHBr）2]溶于2-3mL乙醇（C2H5OH）中，然后用蒸馏水定容到100mL。
2） 碳酸钠溶液
称取10.6g碳酸钠（NaCO3）溶于蒸馏水，并定容到100mL。
b） 乳糖蛋白胨培养基的配制
1）培养液成份
蛋白胨10.0g
牛肉膏3.0g
乳糖5.0g
氯化钠5.0g
溴甲酚紫乙醇溶液(b)-1))1mL
蒸馏水
 
厦门敏测实验器材有限公司供应以上BTB培养基、TCBS培养基、PCA培养基（含氯化钠）、2216E琼脂培养基、 乳糖蛋白胨培养液、EC肉汤、M-TEC培养基等海洋水质监测海水检测培养基。
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