人工游泳池水微生物检验方法及微生物检测试剂

 人工游泳池水微生物指标

GB37488-2019公共场所卫生指标及限制要求中对人工游泳池水质指标卫生要求水质监测项目包括池水温度、pH值、浑浊度、尿素、游离性余氯、细菌总数和大肠菌群等指标 。每个游泳池取2-3个水样进行检测。
其中:细菌总数指标：≤200CFU/ml
大肠菌群指标：不得检出（CFU/100ml或MPN/100ml)
人工游泳池水微生物检测方法
GB37488-2019公共场所卫生指标及限制要求中5.2  游泳池水温度、尿素 透明度和沐浴用水中嗜肺军团菌的检验按GB/T18204执行，游泳场水、沐浴用水水质其他指标和生活饮用水指标检验按GB/T5750执行。
    人工游泳池水微生物项目取样：GBT5750.2-2006微生物取样0.5L，取样工具灭菌瓶。保存方法：每125mL水样加入0.1mg硫代硫酸钠去除残留余氯。低温0~4摄氏度避光保存，保存时间4小时。
　　（一）细菌总数测定
　　1．采样瓶的要求和预处理用于微生物分析的采样瓶要无酸、无碱、无毒的玻璃容器。采样瓶在灭菌前加入足量的10％（g／ml）硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液。一般情况下125ml的采样瓶加0.1ml，加完后12l℃高压灭菌20分钟。
　　2．用灭菌吸管吸取均匀水样1ml，注入到灭菌平皿内，另取1m1注入另一灭菌平皿内作平行接种。在取1ml加到9ml无菌生理盐水中作1∶10稀释，混匀后取2ml分别加到2个无菌平皿内，每皿1ml。
　　3．将溶化并冷却至45℃的营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15ml，另取一个不加样品的无菌平皿作空白对照。立即旋摇平皿，使水样和培养基充分混匀。待琼脂凝固后翻转平皿，置36℃±1℃恒温箱内培养48小时。
菌落计数方法
  先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5~10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数，若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。
　　（二）大肠菌群测定
　　1．多管发酵法在2个装有50ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的大试管或烧杯内各加入水样100ml。在10支装有5ml三倍浓缩乳糖胆盐培养液的试管里各加入水样10ml。轻摇试管，使液体充分混匀，置36℃±1℃培养箱中，培养24小时。观察每管是否产气，如不产气则报告为大肠菌群阴性；若有气体产生则为推测性试验阳性，需做进一步的证实试验。
　　2．滤膜法
　　（1）滤膜灭菌：将滤膜放入含蒸馏水的烧杯中，煮沸灭菌3次，每次15分钟。前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂。
　　（2）滤器灭菌：用121℃高压灭菌20分钟或用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
　　（3）水样过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在滤床上。固定好滤器，将100ml水样（如水样含菌数较多，可减少滤水样量或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器阀门，在-0.5大气压下抽滤。
（4）培养：水样滤完后，再抽气约5秒钟，关上滤器阀门，取下滤器。用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在乳糖琼脂分离培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者之间不得留有气泡。然后将平皿倒置，放人360℃±1℃恒温箱内培养18～24小时。
3. 酶底物法
水样稀释
检测所需水样为100mL。若水样污染严重，可对水样进行稀释。取10mL水样加入到90mL灭菌生理盐水中，必要时可加大稀释度。
定性反应
用100mL的无菌稀释瓶量取100mL水样，加入酶底物培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解后，放入36℃±1℃的培养箱内培养24h.
结果判定（定性反应）
水样经24h培养之后如果颜色变黄色，判断为阳性反应，表示水中含有总大肠菌群。水样颜色未发生变化，判定为阴性反应。定性反应结果以总大肠菌群检出或未检出报告。
 
      酶底物法测定大肠菌群原理：
酶底物法采用 ONP（邻硝基苯）这种试剂可以被大肠菌群的β-半乳糖苷酶分解代谢。
当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时,其使用 β-半乳糖苷酶 分解代谢 ONPG,并使大肠菌群从无色变为黄色。

HJ 1001-2018 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法术语
3.1 总大肠菌群 total coliforms
      37℃培养24 h，能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase)，分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG）生成黄色的邻硝基苯酚的肠杆菌科细菌。
3.2粪大肠菌群 fecal coliforms
      又称耐热大肠菌群（thermotolerant coliforms)。 44.5℃培养24 h，能产生β-半乳糖苷酶 (β-D-ga1actosidase)，分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG）生成黄色的邻硝基苯酚的肠杆菌科细菌。
3.3大肠埃希氏菌 Escherichia coli
      俗称大肠杆菌。37℃培养24 h，能产生β-半乳糖苷酶(β-D-ga1actosidase)，分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG）生成黄色的邻硝基苯酚，同时产生β-葡萄糖醛酸酶（β-Glucuronidase)，分解选择性培养基中的4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）释放出荧光物质（4-甲基伞形酮）的肠杆菌科细菌。
 
人工游泳池检测指标细菌总数与大肠菌群，简易微生物实验室即可开展这2个微生物实验。
人工游泳池水微生物检测试剂仪器耗材

产品名称
100mL无菌采样瓶	含硫代硫酸钠
无菌生理盐水	9mL*20支
营养琼脂平板	90mm*20个
大肠菌群酶底物法试剂盒	100个/盒
恒温培养箱	37℃
烘箱	玻璃仪器
移液管	1ml ,10ml或移液器
一次性涂布棒	独立包装

 我公司供应人工游泳池水微生物检测试剂仪器耗材，更多菌落总数大肠菌群检测仪器试剂耗材见：http://www.xmmc17.com/anquan/258.html