军团菌PCR试剂盒

军团菌PCR检测试剂盒

【名称】
通用名称：军团菌PCR检测试剂盒
英文名称： PCR diagnostic kit for Legionella spp.
【使用方向】
军团菌PCR检测试剂盒是快速准确的定性检测水中军团菌数量的试剂盒，PCR 联合酶联免疫检测扩增后样品的原理，样品中细菌浓度达10³cfu/ml就可是实现直接检验。PCR 过程中，一段特殊的DNA 片段被扩增然后通过和标记生物素的探针杂交来检测。通过底物酶的培养后，样品的结果可以通过肉眼判别或者酶标仪来读取。本试剂盒使用嗜肺军团菌及军团属的特异引物，可与样本中的嗜肺军团菌及军团属基因组的相应靶位点特异性结合，利用PCR反应达到对嗜肺军团菌及其他军团菌快速检测的目的。试剂盒具有特异性强的特点，可以将嗜肺军团菌及其他军团菌从其它细菌中特异地区分出来。
 
军团菌PCR检测试剂盒用于食品、饮用水、临床样品以及环境样品中的嗜肺军团菌及其他军团菌的检测。
【样品处理】
1. 取可疑菌落于高压灭菌的装有1ml去离子水的离心管中，12000rpm离心2min，弃上清。
2. 加入200μl无菌水，充分混匀，12000rpm离心2min，弃上清。
3. 加入80μl核酸提取液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100 ℃ 水浴15分钟，冰上放置10分钟后12000rpm离心3min。
4. 取上清液用于PCR检测。
【使用方法】
1. 试剂配制（试剂准备区）
从军团菌PCR检测试剂盒中取出PCR反应液在室温融化，将PCR反应液充分震荡混匀，所有试剂在使用前2000rpm离心10s。设所需要的管数n（n=样本数+1管阳性对照品+1管阴性对照品），每个测试反应体系试剂配置如下表。计算所需要的n管反应的各试剂的使用量，加入至适当体积的无菌离心管中，充分混合均匀，分装至无菌PCR反应管中，每管20μl。每个反应体系试剂用量：PCR反应液19.7μl ，Taq酶0.3μl
2.  PCR扩增（扩增和产物分析区）
将样本、阴性对照品和阳性对照品使用前恢复至室温，2000rpm离心10s。向每个
PCR反应管中分别加入样本、阴性对照品和阳性对照品各5μl，震荡混匀，于2000rpm
离心10s。将PCR管放入PCR仪中，使用以下程序进行扩增反应，整个扩增反应约
需2小时。
3.   结果判断（扩增和产物分析区）
从PCR管中取出2μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。在紫外灯下，阴性对照品没有任何条带；军团菌阳性对照品具有大小为270bp和354bp的两条带；其中270bp的条带为军团菌属特异的条带，而354bp则为嗜肺军团菌种特异的条带。当被检样品经电泳检测出现仅出现270bp大小的条带时则属于军团菌（非嗜肺军团菌）阳性，若出现270bp和354bp的两条带则属于嗜肺军团菌阳性；当未出现条带或所出现的条带大小与阳性对照品的条带大小不一致时均视为阴性结果。
【注意事项】
1.   本试剂盒不做临床诊断。
2.   实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，试验人员必须进行专业培训，实验过程中严格分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区用品不能交叉使用。
3.  样本准备和试剂准备阶段应使用生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器。
4.  对每次实验进行质量控制。
5.  试剂使用前要完全解冻，并混合均匀，但应避免反复冻融。
6.  样本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃。
7.  实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器。
8. 所有检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
【军团菌PCR检测试剂盒主要组成部分】

军团菌PCR检测试剂盒	组份	规格	数量	贮存温度
	核酸提取液	1ml/支	2支	-20℃
	军团菌 PCR反应液	500μl /支	1支
	Taq酶	12μl /支	1支
	军团菌阳性对照品	100μl /支	1支
	阴性对照品	100μl /支	1支

【储藏条件及有效期】    
-20℃保存，避免反复冻融，有效期一年。
 
 
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