食源性致病菌环介导恒温扩增（LAMP）检测试剂盒

食源性致病菌环介导恒温扩增（LAMP）检测试剂盒

                                                                                                                                                                   -------微生物快检试剂盒

 
       食源性致病微生物检测是国际通行的食品安全领域中最主要任务，随着我国社会发展水平的提高，也日益成为食品安全的主题。沙门氏菌，金黄色葡萄球菌，单增李斯特氏菌是最常见的必检致病菌。
 
       食源性致病菌环介导恒温扩增（LAMP）检测方法整个检测时间约为19 h（包括过滤1 min、增菌18 h、DNA 提取15 min、LAMP 扩增45 min）。与其他方法相比，LAMP 方法操作更简单，不需昂贵仪器，仅水浴锅就可以完成，且结果可用肉眼直接观察，已被成功应用于各种食源性致病菌的快速检测。
 
        “食源性致病菌环介导恒温扩增（LAMP）检测方法”系列标准涵盖最主要的十五种致病菌（SN/T2754.1-15），已于2011年7月在全国颁布实施，华峰公司生产的试剂盒于2011年以来由国家标准认证监督委员会主持陆续逐一认证，已广泛应用于肉类，水产，乳类、蔬菜及其加工制品的食品安全检测。
ＳＮ／Ｔ２７５４《出口食品中致病菌环介导恒温扩增（ＬＡＭＰ）检测方法》共分为１５个部分：
———第１部分：金黄色葡萄球菌；
———第２部分：大肠杆菌Ｏ１５７；
———第３部分：志贺氏菌；
———第４部分：单核细胞增生李斯特菌；
———第５部分：副溶血性弧菌；
———第６部分：小肠结肠炎耶尔森氏菌；
———第７部分：空肠弯曲菌；
———第８部分：肺炎克雷伯氏菌；
———第９部分：溶血性链球菌；
———第１０部分：产气荚膜梭菌；
———第１１部分：产霍乱毒素的霍乱弧菌；
———第１２部分：溶藻弧菌；
———第１３部分：创伤弧菌；
———第１４部分：假结核耶尔森氏菌；
———第１５部分：阪崎肠杆菌。
以下以金黄色葡萄球菌LAMP试剂盒为例：
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）在自然界中无处不在，因而食品受其污染的机会很多。在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。金黄色葡萄球菌食物中毒的食品主要有各类生肉、熟肉制品，乳及乳制品、蛋及蛋制品和部分淀粉类食品。本公司自主研发的金黄色葡萄球菌LAMP检测试剂盒能快速特异地检测出此类食品中含有的金黄色葡萄球菌。本品在65℃恒温条件下扩增金黄色葡萄球菌核酸保守序列，其检测过程在专利的“分格式PCR管”中进行，在封闭的反应体系中实现核酸扩增。本品检测灵敏度高，能检测出各类食品中≤10CFU/25g样品的金黄色葡萄球菌。

图1 HF反应管示意图

左图为HF管分区示意图，右图为阳性反应管和阴性反应管图。

操作流程:

1. 样本处理
    增菌：按 GB4789.10-2010 对样品进行增菌。
  （1） 增菌液DNA的制备：
a) 取标准方法培养的增菌液1mL加到1.5mL无菌离心管中，10000r/min离心2min，尽量吸弃上清；
b) 加入80μL DNA提取液，混匀后沸水浴10min，置冰上10min；
c) 10000 r/min离心2min，上清即为核酸模板；取上清置-20℃可长期保存备用。
  （2） 可疑菌落模板DNA的制备：
对于标准方法分离到的可疑菌落，可直接挑取可疑菌落，加入80μL DNA提取液，混匀后沸水浴10min，置冰上10min再按照上述步骤C)制备模板DNA以待检测。
2. 核酸扩增
a) 取出n支HF反应管(n=1管阴性对照+样本数+1管阳性对照)于室温解冻；
b) 向上述n个反应管内按顺序分别加入阴性对照、待检模板和阳性对照各2.5mL，注意加样时枪头要穿透稳定液层加至HF反应管大腔内（见图1，工作液腔），盖紧管盖并做好标记，移至反应区；
c) 置65℃恒温反应60min。
3. 结果检测
反应结束，将HF反应管倒置甩动2次，再正置甩动2次，使工作液与显色液充分混合，冷却至室温后观察；建议在黑色背景下观察。

技术参数：
1、检测范围：
本品以金黄色葡萄球菌核酸保守序列为检测靶标，用于食品中金黄色葡萄球菌DNA的定性检测，可检测金黄色葡萄球菌。
2、灵敏度和特异性：
以6株金黄色葡萄球菌和5株阴性菌株为标准，本品灵敏度为100%，特异性为100%，各项性能指标如下：
（1） 纯菌液灵敏度检测低限为10³CFU/mL，人工模拟食品样品试验检测低限为≤10CFU/25g（表略）；
（2）  用阴性菌株（10⁷ CFU/mL）进行检测，符合率为5/5；
（3）  用经确认的金黄色葡萄球菌（10⁷CFU/mL）进行检测，符合率为6/6。
 
 3、稳定性：
本品批间差异小，以分离自食品、经确认的阳性菌株和阴性菌株为标准，连续三批产品的灵敏度和特异性均为100%。
在-20℃条件下保质期为一年。
4、储存和运输条件：
需在-20℃储存和运输。尽量避免多次冻融。

产品规格：
1、包装规格：24测试/盒 
2、组成成分： 

	规  格
DNA提取液	1.2mL×2管
HF反应管＊ Sau	共24管
阳性对照DNA Sau	50μL×1管
阴性对照	50μL×1管

其他致病菌LAMP产品信息：

产品编号	产品名称	包装规格	备注
FD-01B	沙门氏菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-02B	单核细胞增生李斯特氏菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-03B	金黄色葡萄球菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-04B	大肠埃希氏菌O157:H7 LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-05B	副溶血性弧菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-06B	志贺氏菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-09B	空肠弯曲杆菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-10B	小肠结肠炎耶尔森氏菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-11B	创伤弧菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-12B	霍乱弧菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-13B	阪崎肠杆菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	现货供应
FD-14B	溶藻弧菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产
FD-15B	肺炎克雷伯氏菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产
FD-16B	产气荚膜梭菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产
FD-17B	蜡样芽胞杆菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产
FD-18B	假结核耶尔森氏菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产
FD-19B	溶血性链球菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产
FD-21B	布鲁氏菌LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产
FD-22B	霍乱弧菌O1群LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产
FD-23B	霍乱弧菌O139型LAMP核酸检测试剂盒	24T	定制生产