食源性致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测试剂盒
食源性致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测试剂盒
-------微生物快检试剂盒食源性致病微生物检测是国际通行的食品安全领域中最主要任务,随着我国社会发展水平的提高,也日益成为食品安全的主题。沙门氏菌,金黄色葡萄球菌,单增李斯特氏菌是最常见的必检致病菌。
食源性致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法整个检测时间约为19 h(包括过滤1 min、增菌18 h、DNA 提取15 min、LAMP 扩增45 min)。与其他方法相比,LAMP 方法操作更简单,不需昂贵仪器,仅水浴锅就可以完成,且结果可用肉眼直接观察,已被成功应用于各种食源性致病菌的快速检测。
“食源性致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法”系列标准涵盖最主要的十五种致病菌(SN/T2754.1-15),已于2011年7月在全国颁布实施,华峰公司生产的试剂盒于2011年以来由国家标准认证监督委员会主持陆续逐一认证,已广泛应用于肉类,水产,乳类、蔬菜及其加工制品的食品安全检测。
SN/T2754《出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法》共分为15个部分:
———第1部分:金黄色葡萄球菌;
———第2部分:大肠杆菌O157;
———第3部分:志贺氏菌;
———第4部分:单核细胞增生李斯特菌;
———第5部分:副溶血性弧菌;
———第6部分:小肠结肠炎耶尔森氏菌;
———第7部分:空肠弯曲菌;
———第8部分:肺炎克雷伯氏菌;
———第9部分:溶血性链球菌;
———第10部分:产气荚膜梭菌;
———第11部分:产霍乱毒素的霍乱弧菌;
———第12部分:溶藻弧菌;
———第13部分:创伤弧菌;
———第14部分:假结核耶尔森氏菌;
———第15部分:阪崎肠杆菌。
以下以金黄色葡萄球菌LAMP试剂盒为例:
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)在自然界中无处不在,因而食品受其污染的机会很多。在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占到45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。金黄色葡萄球菌食物中毒的食品主要有各类生肉、熟肉制品,乳及乳制品、蛋及蛋制品和部分淀粉类食品。本公司自主研发的金黄色葡萄球菌LAMP检测试剂盒能快速特异地检测出此类食品中含有的金黄色葡萄球菌。本品在65℃恒温条件下扩增金黄色葡萄球菌核酸保守序列,其检测过程在专利的“分格式PCR管”中进行,在封闭的反应体系中实现核酸扩增。本品检测灵敏度高,能检测出各类食品中≤10CFU/25g样品的金黄色葡萄球菌。
图1 HF反应管示意图
左图为HF管分区示意图,右图为阳性反应管和阴性反应管图。
操作流程:
1. 样本处理增菌:按 GB4789.10-2010 对样品进行增菌。
(1) 增菌液DNA的制备:
a) 取标准方法培养的增菌液1mL加到1.5mL无菌离心管中,10000r/min离心2min,尽量吸弃上清;
b) 加入80μL DNA提取液,混匀后沸水浴10min,置冰上10min;
c) 10000 r/min离心2min,上清即为核酸模板;取上清置-20℃可长期保存备用。
(2) 可疑菌落模板DNA的制备:
对于标准方法分离到的可疑菌落,可直接挑取可疑菌落,加入80μL DNA提取液,混匀后沸水浴10min,置冰上10min再按照上述步骤C)制备模板DNA以待检测。
2. 核酸扩增
a) 取出n支HF反应管(n=1管阴性对照+样本数+1管阳性对照)于室温解冻;
b) 向上述n个反应管内按顺序分别加入阴性对照、待检模板和阳性对照各2.5mL,注意加样时枪头要穿透稳定液层加至HF反应管大腔内(见图1,工作液腔),盖紧管盖并做好标记,移至反应区;
c) 置65℃恒温反应60min。
3. 结果检测
反应结束,将HF反应管倒置甩动2次,再正置甩动2次,使工作液与显色液充分混合,冷却至室温后观察;建议在黑色背景下观察。
技术参数:
1、检测范围:
本品以金黄色葡萄球菌核酸保守序列为检测靶标,用于食品中金黄色葡萄球菌DNA的定性检测,可检测金黄色葡萄球菌。
2、灵敏度和特异性:
以6株金黄色葡萄球菌和5株阴性菌株为标准,本品灵敏度为100%,特异性为100%,各项性能指标如下:
(1) 纯菌液灵敏度检测低限为103CFU/mL,人工模拟食品样品试验检测低限为≤10CFU/25g(表略);
(2) 用阴性菌株(107 CFU/mL)进行检测,符合率为5/5;
(3) 用经确认的金黄色葡萄球菌(107CFU/mL)进行检测,符合率为6/6。
3、稳定性:
本品批间差异小,以分离自食品、经确认的阳性菌株和阴性菌株为标准,连续三批产品的灵敏度和特异性均为100%。
在-20℃条件下保质期为一年。
4、储存和运输条件:
需在-20℃储存和运输。尽量避免多次冻融。
产品规格:
1、包装规格:24测试/盒
2、组成成分:
规 格 | |
DNA提取液 | 1.2mL×2管 |
HF反应管* Sau | 共24管 |
阳性对照DNA Sau | 50μL×1管 |
阴性对照 | 50μL×1管 |
其他致病菌LAMP产品信息:
产品编号 | 产品名称 | 包装规格 | 备注 |
FD-01B | 沙门氏菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-02B | 单核细胞增生李斯特氏菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-03B | 金黄色葡萄球菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-04B | 大肠埃希氏菌O157:H7 LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-05B | 副溶血性弧菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-06B | 志贺氏菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-09B | 空肠弯曲杆菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-10B | 小肠结肠炎耶尔森氏菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-11B | 创伤弧菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-12B | 霍乱弧菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-13B | 阪崎肠杆菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 现货供应 |
FD-14B | 溶藻弧菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |
FD-15B | 肺炎克雷伯氏菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |
FD-16B | 产气荚膜梭菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |
FD-17B | 蜡样芽胞杆菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |
FD-18B | 假结核耶尔森氏菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |
FD-19B | 溶血性链球菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |
FD-21B | 布鲁氏菌LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |
FD-22B | 霍乱弧菌O1群LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |
FD-23B | 霍乱弧菌O139型LAMP核酸检测试剂盒 | 24T | 定制生产 |